标准号：T/YYTC 009-2024
标准名称：吉林长白山灵芝菌种生产技术规程
团体名称：吉林省园艺特产协会
发布日期：2025年01月01日
实施日期：2025年01月01日
吉林长白山灵芝菌种生产技术规程
1范围
本文件确立了吉林长白山灵芝菌种生产的程序，规定了术语和定义、场地环境、设施设备、制种技术、检验规则、包装、运输等阶段的操作指示，描述了生产记录与档案追溯方法。
本文件适用于吉林长白山灵芝菌种生产要求。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB150.1压力容器第1部分：通用要求
GB5749生活饮用水卫生标准
GB4806.7食品用接触用塑料材料及制品
NY/T1276农药安全使用规范总则
NY/T1731食用菌菌种良好作业规范
NY/T1742-2009食用菌菌种通用技术要求
NY/T528-2010食用菌菌种生产技术规程
3术语和定义
GB/T12728界定的以及下列术语和定义适用于本文件。
3.1
地理标志吉林长白山灵芝GanodermalucidumfromChangbaiMountain,JilinProvince
在中华人民共和国农业农村部吉林长白山灵芝（2018年第62号）公告区域范围内，按照吉林长白山灵芝生产技术生产，质量符合本标准要求的赤芝[Ganodermalucidum（Leyss.ExFr.）Karst]子实体。
3.2
菌种
生长在适宜基质上具有结实性的菌丝培养物，包括母种、原种和栽培种。
[来源GB/T12728]
4技术流程
5场地环境
5.1场地选择
5.1.1选择地势高燥、平坦，通风良好，排水畅通，交通便利的场所，周边环境清洁，无污染源。
5.1.2300m之内无规模养殖的禽畜舍、垃圾和粪便堆积场，无污水、废气、烟尘和粉尘等污染源，50m内无食用菌栽培场所、集贸市场。
[来源：NY/T528—2010中4.2，有修改]
5.2生产用水
生产用水应符合GB5749的规定。
6设施设备
6.1基本设施及布局
基础设施及布局应符合NY/T528中4.3和4.4.2规定。
6.2基本设备
天平（感量0.1g～0.001g）、高压灭菌锅（1.05kg/cm2）、粉碎机、磅秤、超净工作台或接种箱、空调、除湿机、培养架、恒温培养箱、冰箱、显微镜等。生产量大的菌种厂还应配备搅拌机、装袋机。
7制种技术
7.1菌种选择
应选择经过省级及以上行业主管部门审（认）定或登记（备案）、具有食用菌菌种生产和经营资质的供种单位购买，质量应符合NY/T1742的规定。
7.2一级种生产
7.2.1PDA培养基制作
称取200g去皮的马铃薯，切成长和宽0.5cm的条，加1000mL水煮沸20min～30min，8层纱布过滤，取滤液后定容至1000mL，加入20g葡萄糖和18g～20g琼脂粉。
7.2.2分装、灭菌
将配制好的PDA培养基分装至18mm×180mm或20mm×200mm玻璃试管的1/4处。试管口应保持干净，分装后塞入棉塞或硅胶塞，并用牛皮纸包扎。包扎好的直立放在高压灭菌锅内高压蒸汽灭菌，121℃保持30min。
7.2.3摆斜面
灭菌后的试管培养基冷却至60℃±5℃,将试管倾斜摆放在操作台桌面上，试管口比试管底部高1.5cm±0.2cm，摆成斜面培养基，斜面长度约为试管长度的3/4。
7.2.4无菌检验
随机抽取5%的试管斜面培养基（每批抽样量不得少于10支），在35℃±1℃培养2d，检查有无微生物菌落，无菌落的为合格。
7.2.5接种
7.2.5.1超净工作台或接种箱应彻底消毒后方可使用，在接种前用紫外灭菌灯照射30min，接种人员应严格按照无菌操作要求进行手和衣物的消毒。
7.2.5.2接种用具使用前在酒精灯火焰上灼烧灭菌、冷却。接种时一只手握斜面试管，另一只手迅速拔开试管塞，用接种铲取3mm～5mm大小的菌种块迅速放在待接斜面培养基中央位置，迅速用棉塞或硅胶塞塞好试管，整个操作过程应在火焰周围10cm范围内进行。
7.2.5.3将接种好的试管贴好菌种名称、接种日期的标签。
7.2.6培养
接种后的试管置于25℃±2℃的培养箱避光培养。于接种后第2天和第5天分别进行逐个检查，挑出未活、污染和生长不良试管。
7.2.7菌种质量标准
菌种质量应满足表1要求。
表1灵芝母种感官要求
项目 要求 来源
容器 完整、无损、洁净 NY/T1742—2009中表1
气味 无异味
拮抗线 无 NY/T1742—2009中表1,有修改
菌丝生长量 长满斜面
菌丝体特征 白色绒毛状、生长致密、均匀、健壮、
项目 要求 来源
平整、无变黄
菌丝分泌物 无
菌落边缘 整齐
杂菌 无
斜面背面观 培养基不干缩、无水珠、无色素、颜色
均匀
棉塞或硅胶塞 干燥、整洁、松紧适度、既满足透气又
保证过滤空气
斜面长度 顶端距塞30mm±5mm
7.2.8母种保藏
在4℃~6℃下避光保藏，保藏期不超过90天。
7.3原种、栽培种生产
7.3.1培养料
木屑、麸皮等要求新鲜、无虫、无螨、无霉、洁净、干燥。配方可选择下列其中之一：
a)阔叶木屑78%，麸皮20%，石膏1％，过磷酸钙1%；
b)棉籽壳50%，阔叶木屑30%，麸皮17%，蔗糖1%，石膏1％，石灰1%。
7.3.2拌料
按照配方准确称取各种原材料，遵循先干拌再湿拌的原则搅拌均匀，或者使用拌料机拌料，培养料含水量控制在60%±1%。
7.3.3装袋
7.3.3.1拌料结束后立即装入聚丙烯塑料袋，聚丙烯塑料袋应符合GB4806.7的要求。
7.3.3.2原种袋采用规格为长（12cm～17cm）×宽（22cm～28cm）×厚（0.04cm～0.06cm）；栽培种袋采用规格为长（15cm～17cm）×宽（35cm～38cm）×厚0.05cm。
7.3.3.3装料要求松紧适中，使用无棉盖体或周转棒封口，装好后在4h内装锅灭菌。
7.3.4灭菌
采用高压蒸汽灭菌，灭菌温度达到121℃~126℃后保持2.5h～3.0h。
7.3.5冷却
灭菌结束后，灭菌锅内温度降至50℃~60℃,趁热将料袋搬运到冷却室，冷却至28℃±2℃。
7.3.6接种
7.3.6.1超净工作台或接种箱应彻底消毒后方可使用，在接种前用紫外灭菌灯照射30min，接种人员应严格按照无菌操作要求进行手和衣物的消毒。
7.3.6.2接种用具使用前在酒精灯火焰上灼烧灭菌、冷却。接种时一只手握斜面试管（或菌种袋/瓶），另一只手迅速拔开试管塞（或打开菌种封口物），用接种工具取3mm～5mm大小的菌种块（或2cm3左右的菌种块或2根枝条菌种）迅速接入料袋中央位置，迅速用封口物封好料袋，整个操作过程应在火焰周围10cm范围内进行。
7.3.6.3将接种好的试管贴好菌种名称、接种日期的标签。
7.3.7培养
培养室使用前要彻底消毒和杀虫，药剂的选用和使用应符合GB/T8321（所有部分）和NY/T1276的规定。培养室要求环境干净卫生，通风、避光、保温条件良好，温度控制在25℃±2℃。
7.3.8培养期检查
培养3天后开始不定期检查菌袋，及时清理污染袋、生长不良等不合格菌袋。
7.3.9菌种质量
原种和栽培种质量均应满足NY/T1742—2009中3.2要求，同时还应满足表2要求。
表2灵芝二级种和三级种感官要求
项目 要求 来源
容器 洁净、完整 NY/T1742—2009中表1
培养基 贴壁、无干缩
气味 无异味
海绵塞或无棉盖体 干燥、洁净、松紧适度、能满足透气和滤
菌要求
NY/T1742—2009中表1,有修改
菌丝生长量 长满容器
菌丝特征 菌丝洁白、生长旺盛、整齐
培养基和菌丝体 培养基无干缩现象、无菌皮形成、无原基
形成
菌丝分泌物无杂菌 无
7.3.10原种、栽培种保藏
菌种长好后在4℃~6℃避光保藏，保藏期不超过45天。
8检验
按照NY/T1742中第5章的检验方法进行检验，检验项目应全部符合7.2.7和7.3.9要求，任何一项不符合要求的为不合格菌种。
9包装、运输
9.1包装
9.1.1母种使用锡箔纸包好，外包装采用泡沫箱或有足够硬度的纸箱，内部有缓冲作用的轻质材料填充，要保证使用材料的洁净和空间卫生。要有合格证书和使用说明书。
9.1.2原种和栽培种外包装宜采用有足够硬度的纸箱或塑料箱，菌种之间有缓冲作用的轻质材料填充，要保证使用材料的洁净和空间的卫生。要有合格证书和使用说明书。
9.2运输
9.2.1不应与有毒物品混装运输。
9.2.2宜采用冷链运输。
9.2.3运输过程应有防震、防晒、防尘、防雨、防冻、防杂菌等措施。
10生产记录与档案
应详细、准确、真实记录生产过程，记录信息如附录A，并建立生产记录档案，档案应保存至菌种售出后2年，做到可追溯。
生产档案应记录生产地点、时间、数量、培养基配方、培养条件、菌种来源、操作人、技术负责人、检验记录、菌种流向等内容。
起草单位：吉林农业科技学院、吉林省园艺特产管理站、吉林农业大学、公主岭市农业综合 行政执法大队、长春大学、北华大学、吉林省科学技术信息研究所、吉林省农业技术推广站、吉林市种 子管理站、吉林一亩田农业技术开发有限公司、白山市永盛农业科技开发有限公司、吉林省蒽芝康生物 科技有限公司、蛟河市黄松甸镇康芝园灵芝专业合作社、吉林芝福生物科技有限公司、惠丰菌业（吉林 省）有限公司、吉林芝业生物科技有限公司
起草人：徐济责、柴秋泉、刘晓龙、杨思思、李雷、周思意、张春兰、陈昊良、周金梅、 沈健、张晓旭、张雪超、秦影、张桐、包建琴、曹中丽、周学峰、金元举、王子旭、张庆康、郑目君、 于涛、王大权。