标准号：T/ZHYX 003-2025
标准名称：灌洗法提取小鼠肺泡巨噬细胞及体外培养操作规程
团体名称：天津市整合医学学会
发布日期：2025年09月18日
实施日期：2025年10月01日
6细胞提取：
6.1无菌准备--在开始实验前，超净台应使用紫外灯照射25分钟。解剖工具、离心管以及BAL灌洗液(含0.5mMEDTA的PBS)等实验期间所需所有耗材及试剂均应进行高压灭菌，并在无菌环境中烘干至完全干燥。应保证所有提取过程均在超净台中进行。
6.2细胞收集---按每只小鼠准备一个15mL的离心管，管内装有3mLDMEM完全培养基（10%胎牛血清）。然后将BAL灌洗液在水浴中加热至37℃，并且在整个实验过程中要注意保持温度不变。
6.3细胞培养--在300g,4℃的条件下，将收集到的BAL灌洗液离心5分钟，去除上清，将沉淀物用DMEM完全培养基重悬后置于6孔板中，4小时后弃去上清，换液，并提高胎牛血清含量至20%以促进其增殖。
6.4工艺要求--对提取小鼠肺泡巨噬细胞灌洗液中EDTA的含量、成分、温度以及体外培养等条件进行摸索，建立基于提取细胞数量、质量和纯度等参数的评价体系。
起草单位：天津中医药大学，天津医科大学，天津市人民医院，天津市肿瘤医院，天津医科大学第二附属医院，四川大学，天津大学，中科院天津工业微生物所，南开大学
起草人：于海洋，韩立峰，王涛，蒲位凌，尹双双，邵莹莹，胡高勇，苏仁敬，邱玉玲，张春泽，刘博，姬小元，校海霞