标准号：T/FSSJ SYNY002-2017
标准名称：香菇栽培种工厂化生产技术规程
团体名称：辽宁省食用菌协会
发布日期：2017年10月18日
实施日期：2017年10月18日
1 要求
1.1 技术人员
应有与液体菌种生产所需的专业技术人员，包括检验人员。
1.2 生产场地、厂房和布局
符合NY/T528规定。
1.3 生产设施与设备
符合NY/T528规定。
高压灭菌锅和蒸汽锅炉应符合GB150.1～150.4压力容器规定，并经政府有关部门检验合格。
1.4总生产工艺流程
母种→摇瓶液体种→发酵罐液体种→栽培种。
1.5 质量要求
1.5.1培养基
母种培养基使用附录A中A.1规定的马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）或A.2规定的综合马铃薯葡萄糖琼脂培养基（CPDA）。
液体种培养基根据香菇品种及当地原料的要求使用适宜配方（见附录B），严格掌握初始pH。
栽培种培养基配方参照NY/T528标准附录B原种和栽培种常用培养基配方及其适用种类，根据香菇品种及当地原料的要求选择使用。
1.5.2母种
母种继代培养后需按NY/T1846规定抽样，并进行感官检验和菌丝微观特征检验，合格菌种进入生产流程。
母种质量要求符合NY/T1742关于母种生产的规定。
1.6 摇瓶液体种技术要求
1.6.1培养基分装及灭菌
摇瓶液体种培养基装量应为容器体积的1/4至1/3，分装后应立即灭菌。按常规高压蒸汽灭菌锅操作规程，0.1Mpa～0.12Mpa（121℃～126℃），维持25min。
1.6.2 灭菌效果的检查
灭菌后的摇瓶液体种培养基于30℃±1℃培养箱恒温培养48小时后，观察确认无混浊、无异味，即可用于接种。
1.6.3 接种
严格按无菌操作程序，将母种斜面菌丝体切割成2mm～4mm颗粒，移入摇瓶培养基中，每100mL液体培养基接种菌丝体颗粒1颗～3颗。
1.6.4 培养条件
菌种培养温度26℃±1℃，空气相对湿度55%～65%，避光振荡培养。往复式摇床振荡频率60次～120次/分；旋转式摇床振荡频率150转～180转/分。
1.6.5 培养期的检查
每日检查生长状态，及时检出浑浊、异味、泡沫异常的不合格菌种。
1.6.6 培养结束
摇瓶静置1分钟后，菌丝球体积占比液体培养基体积的4/5以上，可结束培养。
1.7 发酵罐液体种技术要求
1.7.1 空气过滤器检查
滤芯在额定风量下，对粒径0.1～0.2μm粒子的过滤效率，在99.999%以上。空气阻力在280pa以下。所有材质耐126℃高温。
使用前要拆分检查滤芯，要求无油污、料污、无破损，外壳内外壁要求无污物、光亮洁净。
1.7.2发酵罐检查与清洗
检查罐上全部阀门、安全阀、压力表、要求完好，工作正常。
对罐体内、外和全部阀门用流水进行冲洗，达到无死角、内壁无任何培养料残余物的洁净程度。
1.7.3 煮罐和空消
发酵罐初次使用、出现染菌、长期放置、更换品种时，都要求煮罐和空消进行灭菌。有内置电加热棒的培养器加水至容积的80%加热至121℃，维持40min。用外源蒸汽灭菌的培养器，蒸汽压力达到0.1Mpa～0.12Mpa（121℃～124℃），维持40min。
1.7.4投料与定容
将配制好的培养基材料搅拌均匀，倒入或用泵抽入发酵罐中，加水定容至所需体积。培养基投料总量为罐体总容积的70%～80%。
1.7.5 培养基灭菌
按常规高压蒸汽灭菌方法操作，培养器内压力达到0.1Mpa～0.12Mpa，培养基温度达到121℃～124℃、保持时间60min～90min。
1.7.6 冷却降温
灭菌结束将培养基降温至24℃～28℃。降温过程中要及时向培养器内补充过滤空气，防止罐压回零。
1.7.7 接种
利用火焰保护接种，接种量为罐内培养基总量的0.1%～0.5%。
1.7.8 液体菌种培养条件
通风量每分钟1：0.5～1.2V／V(料液体积／空气体积)，调节罐压保持在0.02Mpa～0.04Mpa，培养温度调节在24℃～26℃。
特殊品种根据特殊需求具体设定。
1.7.9 培养时间
上述条件下培养7d～10d可达到香菇液体菌种成品标准。
1.8 抽样与检测
1.8.1 抽样
培养过程中定期从培养器中取出的样品，用作镜检和其它理化指标测定。
1.8.2 检测
按照NY/T1846中感官检验、菌丝微观特征检验、霉菌、细菌检验进行。
1.9 合格液体菌种判定
1.9.1 感官指标
液体菌种球状菌丝体呈白色，滤液呈淡黄色。菌球分布均匀、浓白清晰，有香菇液体菌种培养时特有的香气，无异味。
1.9.2 液体菌种pH值
终pH值在3.5～4.0之间。
1.9.3菌丝生物量
每100ml液体菌种菌丝干重为0.4～2.0g/100ml。
1.9.4显微检测
香菇液体菌种菌丝形态和纯度鉴别。球状菌丝体大量分布，菌丝粗壮，菌丝内原生质分布均匀。
1.9.5判定规则
感官检验、菌丝微观特征检验、霉菌、细菌检验、pH值、菌丝生物量、显微检测均符合标准要求的，为合格菌种。
任何一项不符合标准要求的，为不合格菌种。
2栽培种技术要求
2.1培养基制备
2.1.1.配料装袋
采用配套机械二级拌料法。按配方比例将木屑粗料先预湿后再同其他主料混合进行一级拌料，然后再加入辅料进行二次拌料。要求拌料均匀、含水量达标。
采用机械装袋、窝口，插入专用塑料芯塞。
2.1.2灭菌与冷却
按高压蒸汽灭菌规程操作，排除冷空气后，升温至121℃持续2.5h。灭菌后采用阶梯渐进式排气降压处理。
降压结束迅速进入冷却室，开启降温处理。当袋内温度降至25℃以下可以接种。
2.2接种
2.2.1 在净化室内严格按无菌操作规程进行接种，及时用无菌海绵塞封口。
2.2.2 液体菌种接种量为20ml～30ml/袋。
2.3栽培种培养管理
2.3.1温度
培养温度程控管理，以袋内中心温度为管控标准，保持袋内温度22℃～23℃。全程监控培养室空间温度、袋间温度和袋内温度。防止高温伤热和过度温差产生。
当菌丝长满菌袋后，降低空间温度到10℃～15℃，持续内循环通风7～10d。
2.3.2湿度培养室内空间相对湿度控制在55%以下。
2.3.3光照避光管理。
2.3.4通气
接种后静置培养，5d后启动内循环通风。
12d～15d生物热产生，加强通风保持温度，直到后期30d～35d菌丝长满菌袋。培养室内CO2浓度控制在300ppm以下。
2.4 抽样与检测
2.4.1 抽样
按照NY/T1846中栽培种抽样标准抽样。
2.4.2 检测
按照NY/T1846中感官检验、菌丝微观特征检验、霉菌、细菌检验、菌丝生长速度测定进行。
2.5 合格栽培种判定规则
感官检验、菌丝微观特征检验、霉菌、细菌检验、菌丝生长速度测定均符合标准要求的，为合格菌种。
任何一项不符合标准要求的，为不合格菌种。
2.6贮藏备用
将经检查合格菌种放于洁净的1～4℃冷库中短期保存备用。
3记录与存档
液体菌种、栽培种生产的每个环节均有生产记录，由具体操作人员现场记录填写，建立可追溯性档案后，归档保存。
4留样
每个批次栽培种袋按1%比例留样，放于1～4℃冷库中保存，直到本批次栽培种接种后正常出菇结束。
5标签标志包装运输
符合NY/T528关于标签标志、包装运输的要求。
起草人：邹存兵、赵凯、朱巍巍、陈飞、张忠伟、黄云松、李颖