标准号：T/HBZLWH 002-2024
标准名称：污水、污泥中总大肠菌群、粪大肠菌群和 大肠埃希氏菌的测定 荧光光度法
团体名称：河北省质量文化协会
发布日期：2024年12月10日
实施日期：2024年12月10日
9.1接种
9.1.1污水接种：将100mL待测样品放入含有2g培养基（5.2.1或5.2.2）的检测瓶（6.4）中，混匀。
9.1.2污泥接种：制备后的污泥样品用天平（6.5）称取10.0g放于灭菌三角瓶中，加100mL无菌水(5.7),充分摇匀，若污泥样品颗粒较大，可将三角瓶置于振荡器上振荡3min,制成均匀样液，作为原液。用10mL灭菌移液管吸取10mL原液加入装有90mL无菌稀释水(5.8)的三角瓶中，摇匀，制成1:10稀释度的均匀样液。按上述操作步骤，依次配制稀释10倍样液，如此每递增1次，即换用1支10mL灭菌移液管。根据污泥样品含菌量的估计，选择2个或3个适宜浓度的稀释样液100mL加入含有2g培养基（5.2.1或5.2.2）的检测瓶（6.4）中，混匀。
9.2培养和检测
打开仪器电源开关，将接种后的检测瓶放置于微生物快速检测仪中，按照仪器说明书进行操作，选择相应的测定参数，“总大肠菌群和大肠埃希氏菌”或“粪大肠菌群”，点击“检测”按钮，2h～18h，仪器自动培养得出结果。
10对照试验
10.1空白对照
采用无菌水（5.7）作为待测水样按照9.1和9.2进行空白测定，测试结果不应检出，否则该次样品测定结果无效，应重新测定空白以及待测样品。
10.2阴性和阳性对照
总大肠菌群、大肠埃希氏菌、粪大肠菌群的阴性、阳性菌株参考表3。
表3阴性、阳性菌株参考表
检测指标 阳性菌种 阴性菌种
总大肠菌群 大肠埃希氏菌(Escherichiacoli) 假单胞菌属(Pseudomonassp.)
大肠埃希氏菌 大肠埃希氏菌 假单胞菌属
粪大肠菌群 大肠埃希氏菌（耐热型） 假单胞菌属
将阳性菌株大肠埃希氏菌(Escherichiacoli)标准菌株ATCC25922(CICC10305或其他等效标准菌株)和阴性菌株假单胞菌属(Pseudomonassp.)有证标准物质NCTC12951或其他等效标准菌株制成300个/mL～3000个/mL的菌悬液，将菌悬液按接种(9.1)和培养和检测(9.2)要求操作，阳性菌株应呈现阳性反应；阴性菌株呈现阴性反应，否则，该次样品测定结果无效，应重新测定。
注：可先制备较高浓度菌悬液，采用血球计数器在显微镜下对其浓度进行初步测定，然后根据实际情况用无菌水(5.5)稀释至300个/mL～3000个/mL。
起草人：白玉玮、宁静、薛飞、赵伦、李亚娜、林孔亮、王兵、霍鹏、郭林水、辛超英、马聪士、王冰然、刘翠棉、刘娟、冀建南、戚娟娟、王珣、张丽、贡丽楠、李诗话、杨东洁、刘紫倩、董龙周、霍晓通、张靖、李再兴、王彦雷、张伟、朱亚强、李子龙、何晓云、张红蕊、邵铁梅、潘雪珍、潘国荣、林俐、杨丽丽、姜建彪、戴春岭、朱高云、曾慧、陈健烺、胡颖斌、任柯柯、司徒晓英、吴海鹏、唐炜文、姜萍萍、肖源、陈霓彤、陈璐、蔡婉冰、李偲琳、骆承康、包伟群、王庆生、何振乾、杨森滔、杨春锋、沈国庭、班赛楠、蔚波。