标准号：T/CGTA 03-2024
标准名称：发芽糙米中γ-氨基丁酸的测定 高效液相色谱-串联质谱法
团体名称：中国粮食商业协会
发布日期：2024年09月20日
实施日期：2024年11月20日
4 原理
试样经甲酸水溶液提取γ—氨基丁酸，用高效液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。
5 试剂与材料
除非另有规定，使用试剂均为色谱纯。水为GB/T6682中规定的一级水。
5.1 试剂
5.1.1 甲醇（CH3OH）。
5.1.2 甲酸（HCOOH）。
5.2 试剂配制
5.2.1 0.1%甲酸水溶液：准确吸取1.00mL的甲酸（5.1.2）用水定容至1000mL。
5.2.2 甲醇+0.1%甲酸水溶液=1+9（V+V）：取100mL甲醇（5.1.1）和900mL0.1%甲酸水（5.2.1）溶液混合，用滤膜（0.22μm，有机相）过滤后备用。
5.3 标准品
γ—氨基丁酸标准品（CAS号：56-12-2）：纯度≥99%或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。
5.4 标准溶液配制
5.4.1 γ—氨基丁酸标准储备溶液：准确称取γ—氨基丁酸标准品（5.3）10.0mg（精确至0.0001g），用水溶解并定容至10mL，此溶液浓度为1mg/mL。储存于4℃冰箱中，有效期3个月。
5.4.2 γ—氨基丁酸标准系列工作溶液：将γ—氨基丁酸标准储备溶液（5.4.1）用0.1%甲酸水溶液（5.2.1）配制成2μg/mL标准中间液，再稀释成10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL、80ng/mL、160ng/mL、400ng/mL标准系列工作溶液，临用时配制。
6 仪器与设备
6.1 液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源。
6.2 分析天平：感量为0.0001g。
6.3 超声波清洗器。
6.4 漩涡混匀器。
6.5 离心机：转速≥6000r/min。
7 试样制备与保存
样品混匀后，取200g样品经四分法缩分至约50g，研磨至全部通过孔径0.25mm（60目）筛的试样，装入密封的容器中，室温下保存。
8 分析步骤
8.1 提取
称取0.5g样品（7）（精确至0.0001g）于50mL离心管中，加入10mL0.1%甲酸水溶液（5.2.1），30℃超声提取30min后在漩涡混匀器（6.4）上涡旋2min，于6000r/min离心5min，将上清液转入25mL容量瓶中，样品残渣再用10mL的0.1%甲酸水溶液（5.2.1）重复上述提取步骤提取一次，合并2次提取液，用0.1%甲酸水溶液（5.2.1）定容至25mL，摇匀备用。根据需要用0.1%甲酸水溶液（5.2.1）稀释至标准曲线线性范围内，混匀，经微孔滤膜（0.22μm）过滤待测。
8.2 仪器参考条件
8.2.1 液相色谱条件
a) 色谱柱：C18色谱柱（2.1×150mm，1.7μm），或性能相当者；
b) 流动相：甲醇+0.1%甲酸水溶液=1+9（V+V）（5.2.2）
c) 进样量：2μL；
d)柱温：35℃；
e) 流速：0.2mL/min。
8.2.2 质谱条件
a) 离子源：电喷雾电离源（ESI）；
b) 扫描方式：正离子扫描；
c) 检测方式：多反应监测（MRM）；
d)离子源温度：550℃；
e) 气帘气：35psi；
f) 离子喷雾电压：5500V；
g) 定性离子对、定量离子对、去簇电压和碰撞能见表1。
8.2.3 定性确证
按照仪器参考条件测定试样溶液和标准工作溶液，试样中的γ—氨基丁酸质量色谱峰保留时间与标准工作溶液一致（变化范围在±2.5%之内）；且试样中γ—氨基丁酸的两个子离子的相对丰度比（k）与浓度相当标准工作溶液中γ—氨基丁酸的两个子离子的相对丰度比相比，其允许偏差不超过表2规定的范围，则可判定为试样中存在γ—氨基丁酸。γ—氨基丁酸标准溶液质量色谱图参见附录A。
允许的最大偏差 ±20 ±25 ±30 ±50
8.2.4 定量测定
将标准系列工作溶液按仪器参考条件进行测定，得到相应的标准系列工作溶液的质量色谱峰面积。以标准系列工作溶液的浓度为横坐标，以质量色谱峰的峰面积为纵坐标，绘制工作曲线，保证样品中γ—氨基丁酸浓度在标准曲线范围内，外标法定量。
9 结果计算
试样中γ—氨基丁酸的含量按式（1）计算。
起草单位：陈克明食品股份有限公司、辽宁寨香生态农业股份有限公司、长沙尚海农业科技股份有限公司、湖南诺千健康管理有限公司、湖南省粮油产品质量监测中心、湖南省农产品加工研究所。
起草人：陈克明、陈幸莺、钟鹏鹏、龚浩如、许艳霞、李志坚、林树化、张瑶、陈立忠、葛胜修、谭莉、邓晓庆、陈旭霞、周希福、黄能文。