标准号：T/SHNX 004-2025
标准名称：生乳中乳铁蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的测定 液相色谱-串联质谱法
团体名称：上海奶业行业协会
发布日期：2025年09月05日
实施日期：2025年09月30日
1 范围
本文件规定了生牛乳中乳铁蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的液相色谱-串联质谱测定方法。
本文件适用于生牛乳中乳铁蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的测定。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 原理
试样中的乳铁蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白经酶解作用水解成特征性肽段，以液相色谱-串联质谱法测定目标蛋白的特征性肽段，基质匹配标准曲线外标法定量，计算试样中乳铁蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的含量。
5 试剂或材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯。
5.1 试剂
5.1.1 水：GB/T6682，一级水。
5.1.2 碳酸氢铵。
5.1.3 二硫苏糖醇。
5.1.4 碘代乙酰胺。
5.1.5 乙酸。
5.1.6 胰蛋白酶：序列分析纯，活力单位≥4500U/mg，或性能相当者。
5.1.7 甲酸：色谱纯。
5.1.8 乙腈：色谱纯。
5.1.9 鸡蛋蛋清粉：食品级。
5.2 试剂配制
5.2.1 碳酸氢铵溶液（100mmol/L）：称取0.79g碳酸氢铵，用水溶解后稀释至100mL。
5.2.2 二硫苏糖醇溶液（500mmol/L）：称取0.771g二硫苏糖醇，用碳酸氢铵溶液（100mmol/L）溶解后定容至10mL。
5.2.3 碘代乙酰胺溶液（500mmol/L）：称取0.925g碘代乙酰胺，用碳酸氢铵溶液（100mmol/L）溶解后定容至10mL。
5.2.4 乙酸溶液（1%）：吸取0.1mL乙酸，用水稀释并定容至10mL。
5.2.5 胰蛋白酶溶液（100μg/mL）：称取1mg胰蛋白酶，用乙酸溶液（1%）溶解后稀释至10mL，现用现配。
5.2.6 甲酸溶液（0.1%）：吸取1.0mL甲酸，用水稀释并定容至1000mL。
5.2.7 甲酸乙腈溶液（0.1%）：吸取1.0mL甲酸，加入乙腈稀释并定容至1000mL。
5.2.8 空白基质溶液：称取0.10g鸡蛋蛋清粉，用水定容至50mL备用。
5.3 标准品
5.3.1 乳铁蛋白标准品（CAS号：146897-68-9）：纯度≥95%，铁含量≤35mg/100g，或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。
5.3.2 α-乳白蛋白标准品（CAS号：9051-29-0）：纯度≥95%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。
5.3.3 β-乳球蛋白标准品（CAS号：9045-23-2）：纯度≥95%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。
5.4 标准溶液配制
5.4.1 乳铁蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白标准储备液（1mg/mL）：分别称取10.0mg乳铁蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白标准品，用水定容至10mL。混匀，0~4℃下保存，可保存3个月。
5.4.2 混合标准中间液（200μg/mL）：分别准确移取2.0mL的乳铁蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白标准储备液于10mL容量瓶中，用空白基质溶液稀释至10mL，现用现配。
5.4.3 标准系列工作液：吸取适量的混合标准中间液，用空白基质溶液逐级稀释至1.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、50.0μg/mL、100.0μg/mL和200.0μg/mL标准系列工作液，现用现配。
5.5 材料
5.5.1 1.5mL离心管：聚丙烯材质。
5.5.2 50mL离心管：聚丙烯材质。
5.5.3 水相微孔滤膜：0.22μm，聚醚砜材质。
起草单位：祁兵、陈柔含、马颖清、沈秀平、邓波、周雨璊、郑小平、徐致远、朱伟、王敏、卢洪秀、吴剑平、陈小弟、金佳伟
起草人：祁兵、陈柔含、马颖清、沈秀平、邓波、周雨璊、郑小平、徐致远、朱伟、王敏、卢洪秀、吴剑平、陈小弟、金佳伟